Apprenez à créer un tampon TAE en quelques étapes

Le tampon TAE est une solution composée de base Tris, d'acide acétique et d'EDTA (Tris-acétate-EDTA). C'est historiquement le tampon le plus couramment utilisé pour le gel d'agarose électrophorèse dans les analyses des produits d'ADN résultant de PCR amplification, ADN protocoles de purification ou Clonage d'ADN expériences.

Ce tampon a une faible force ionique et une faible capacité tampon. Il est mieux adapté à l'électrophorèse de gros morceaux d'ADN (> 20 kilobases) et devra être remplacé fréquemment ou remis en circulation pendant des durées de gel plus longues (> 4 heures). Dans cet esprit, vous voudrez peut-être envisager de faire plusieurs lots de la mémoire tampon.

Étant donné que le tampon est facile à réaliser et que les étapes peuvent être exécutées rapidement, la création de plusieurs lots à la fois ne devrait pas être particulièrement longue ou difficile. En utilisant les instructions ci-dessous, cela ne devrait prendre que 30 minutes pour faire le tampon TAE.

Ce dont vous avez besoin pour le tampon TAE

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Étant donné que la création du tampon TAE ne nécessite qu'un ensemble d'instructions rapide et simple, le nombre de matériaux nécessaires n'est pas excessif. Vous aurez juste besoin du sel disodique EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique), de la base Tris et de l'acide acétique glacial.

La fabrication du tampon nécessite également un pH-mètre et des normes d'étalonnage, le cas échéant. Vous aurez également besoin de béchers ou de flacons de 600 millilitres et de 1500 millilitres ainsi que de cylindres gradués. Enfin, vous aurez besoin d'eau désionisée, de barres d'agitation et de plaques d'agitation.

Dans les instructions suivantes, le poids de la formule (la masse atomique de chaque élément est multipliée par le nombre d'atomes, puis la masse de chacun est additionnée) est abrégé en FW.

Préparer une solution mère d'EDTA

Une solution EDTA est préparée à l'avance. L'EDTA n'entrera pas complètement dans une solution jusqu'à ce que le pH soit ajusté à environ 8,0. Pour un stock de 500 millilitres solution d'EDTA 0,5 M (molarité ou concentration), peser 93,05 grammes de sel disodique EDTA (FW = 372,2). Dissolvez-le dans 400 ml d'eau désionisée et ajustez le pH avec de l'hydroxyde de sodium (NaOH). Remplissez la solution jusqu'à un volume final de 500 millilitres.

Créez votre solution de stock

Faire une solution mère concentrée (50x) de TAE en pesant 242 grammes de base Tris (FW = 121,14) et en le dissolvant dans environ 750 millilitres d'eau désionisée. Ajouter délicatement 57,1 millilitres d'acide glaciaire et 100 millilitres d'EDTA 0,5 M (pH 8,0).

Après cela, ajustez la solution à un volume final de 1 litre. Cette solution mère peut être conservée à température ambiante. Le pH de ce tampon n'est pas ajusté et devrait être d'environ 8,5.

Préparer une solution de travail de TAE Buffer

La solution de travail de 1x tampon TAE est faite en diluant simplement la solution mère par 50x dans de l'eau déionisée. Les concentrations finales de soluté sont de 40 mM (millimolaire) de Tris-acétate et 1 mM d'EDTA. Le tampon est maintenant prêt à l'emploi lors de l'exécution d'un gel d'agarose.

Emballer

Vérifiez l'inventaire avant de commencer pour vous assurer que vous disposez de tous les matériaux ci-dessus pour le tampon TAE. Votre personnel d'approvisionnement devrait être en mesure de vous dire s'il a tous les articles dont vous avez besoin en stock. Vous ne voulez pas finir par manquer quelque chose au milieu de la procédure.