Le tampon TBE (Tris-borate-EDTA) est une solution tampon composée de base Tris, d'acide borique et d'EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique). Ce tampon est souvent utilisé pour l'électrophorèse sur gel d'agarose dans l'analyse des produits d'ADN qui résultent de l'amplification par PCR, des protocoles de purification d'ADN ou des expériences de clonage d'ADN.
Utilisations TBE
Le tampon TBE est particulièrement utile pour la séparation de fragments d'ADN plus petits (MW <1000), tels que de petits produits de Enzyme de restriction digère. TBE a une plus grande capacité de mise en mémoire tampon et donnera une résolution plus nette que la mémoire tampon TAE. Le tampon TAE (Tris-acétate-EDTA) est une solution composée de base Tris, d'acide acétique et d'EDTA.
Le TBE est généralement plus cher que le TAE et inhibe l'ADN ligase, ce qui peut poser des problèmes si des étapes ultérieures de purification et de ligature de l'ADN sont envisagées. Avec les trois étapes simples qui suivent, découvrez comment créer un tampon TBE. La création ne devrait pas prendre plus de 30 minutes environ.
De quoi as-tu besoin
Pour faire du tampon TBE, vous aurez besoin de seulement quatre substances. Les autres éléments de cette liste sont des équipements. Les quatre substances requises sont le sel disodique EDTA, la base Tris, l'acide borique et l'eau désionisée.
En ce qui concerne l'équipement, vous aurez besoin d'un pH-mètre et de normes d'étalonnage, le cas échéant. De plus, vous aurez besoin de quelques béchers ou flacons de 600 millilitres et de 1500 millilitres. Les cylindres gradués, les barres d'agitation et les plaques d'agitation complètent vos besoins en équipement.
Vérifiez l'inventaire au laboratoire que vous utiliserez pour vous assurer que vous avez tout ce dont vous avez besoin avant de commencer. Rien de pire que de devoir s'arrêter au milieu de la préparation d'une solution parce que vous n'avez plus les bons matériaux.
Si votre laboratoire est à l'école ou sur votre lieu de travail, vérifiez auprès du personnel approprié pour voir s'ils ont tous les articles en stock. Cela pourrait vous faire économiser du temps et de l'énergie à la fin.
Le poids de la formule est abrégé en FW. C'est le poids atomique d'un élément multiplié par le nombre d'atomes de chaque élément dans une formule, puis en additionnant toutes les masses de chaque élément.
Solution mère d'EDTA
Une solution EDTA doit être préparée à l'avance. L'EDTA n'entrera pas complètement dans la solution tant que le pH ne sera pas ajusté à environ 8,0. Pour une solution mère de 500 millilitres d'EDTA 0,5 M, peser 93,05 grammes de sel disodique EDTA (FW = 372,2). Dissolvez-le ensuite dans 400 ml d'eau désionisée et ajustez le pH avec NaOH (hydroxyde de sodium). Après cela, complétez la solution jusqu'à un volume final de 500 millilitres.
Solution mère de TBE
Faire une solution mère concentrée (5x) de TBE en pesant 54 grammes de base Tris (FW = 121,14) et 27,5 grammes d'acide borique (FW = 61,83) et dissoudre les deux dans environ 900 millilitres de désionisé l'eau. Ajouter ensuite 20 millilitres d'EDTA 0,5 M (molarité ou concentration) (pH 8,0) et ajuster la solution à un volume final de 1 litre. Cette solution peut être conservée à température ambiante mais un précipité se formera dans les solutions plus anciennes. Conserver le tampon dans des bouteilles en verre et jeter si un précipité s'est formé.
Solution de travail de TBE
Pour l'électrophorèse sur gel d'agarose, un tampon TBE peut être utilisé à une concentration de 0,5x (dilution 1:10 du stock concentré). Diluer la solution mère par 10x dans de l'eau déionisée. Les concentrations finales de soluté sont de 45 mM de Tris-borate et de 1 mM (millimolaire) d'EDTA. Le tampon est maintenant prêt à être utilisé dans courir un gel d'agarose.