Protocole ou recette de tampon d'électrophorèse 10X TBE

TBE et TAE sont utilisés comme tampons en biologie moléculaire, principalement pour électrophorèse d'acides nucléiques. Les tampons Tris sont utilisés dans des conditions de pH légèrement basiques, comme pour l'électrophorèse d'ADN, car cela maintient l'ADN soluble dans la solution et déprotoné de sorte qu'il sera attiré par l'électrode positive et migrera à travers un gel. EDTA est un ingrédient de la solution parce que ce agent chélatant protège les acides nucléiques de la dégradation par les enzymes. L'EDTA chélate les cations divalents qui sont des cofacteurs des nucléases qui peuvent contaminer l'échantillon. Cependant, étant donné que le cation magnésium est un cofacteur pour l'ADN polymérase et les enzymes de restriction, la concentration d'EDTA est volontairement faible (concentration d'environ 1 mM).

Vous n'avez pas besoin de stériliser la solution. Bien que des précipitations puissent se produire après un laps de temps, la solution mère est toujours utilisable. Vous pouvez ajuster le pH à l'aide d'un pH-mètre et l'ajout goutte à goutte de concentré

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acide chlorhydrique (HCl). Il est bon de stocker le tampon TBE à température ambiante, bien que vous souhaitiez peut-être filtrer la solution mère à travers un filtre de 0,22 micron pour éliminer les particules qui favoriseraient les précipitations.

L'utilisation accidentelle d'une solution mère 5X ou 10X vous donnera de mauvais résultats car autant de chaleur sera générée. En plus de vous donner une mauvaise résolution, l'échantillon peut être endommagé.

Bien que TBE et TAE soient des tampons d'électrophorèse courants, il existe autres options pour les solutions conductrices à faible molarité, y compris le tampon borate de lithium et le tampon borate de sodium. Le problème avec TBE et TAE est que les tampons à base de Tris limitent le champ électrique qui peut être utilisé en électrophorèse car trop de charge provoque une température d'emballement.

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