Le polymorphisme de longueur des fragments de restriction (RFLP) est une méthode moléculaire d'analyse génétique qui permet d'identifier les individus sur la base de modèles uniques de Enzyme de restriction coupe dans des régions spécifiques de l'ADN.
Également appelée analyse RFLP, la technique tire parti de la polymorphismes dans les codes génétiques des individus. Même si tous les membres d'une espèce ont essentiellement la même constitution génétique, ces légères différences expliquent les variations de phénotype, telles que l'apparence ou le métabolisme, entre les individus.
Technique d'analyse RFLP
La technique d'analyse RFLP consiste à couper une région particulière de ADN avec une variabilité connue, avec des enzymes de restriction, puis en séparant les fragments d'ADN par électrophorèse sur gel d'agarose et en déterminant le nombre de fragments et les tailles relatives.
Une enzyme de restriction est une enzyme, une molécule de protéine, qui coupe l'ADN aux sites de restriction. Essentiellement, l'échantillon d'ADN est brisé et digéré par les enzymes de restriction. Les fragments résultants sont séparés en fonction de leurs longueurs, et le modèle des tailles de fragments diffère pour chaque individu testé.
Le processus RFLP complet nécessite le marquage de la sonde, la fragmentation de l'ADN, l'électrophorèse, le transfert, l'hybridation, le lavage et l'autoradiographie. Le RFLP détecté est visualisé à l'aide d'un film radiographique en autoradiographie, où les fragments d'ADN peuvent être visualisés et analysés après avoir été séparés les uns des autres par électrophorèse.
Demande d'utilisation RFLP
Certaines des applications pour l'analyse RFLP comprennent:
- Empreinte génétique: Les médecins légistes peuvent utiliser l'analyse RFLP pour identifier les suspects sur la base d'échantillons de preuves collectés sur les scènes de crimes.
- Paternité: RFLP est également utilisé dans la détermination de la paternité ou pour retrouver l'ascendance.
- Diversité génétique: La technique peut être utilisée pour étudier l'évolution et la migration de la faune, étudier les modes de reproduction dans les populations animales et la détection et le diagnostic de certaines maladies.
La technique d'utilisation de la détection RFLP de la variation des génomes est un outil essentiel dans la cartographie du génome et l'analyse des maladies génétiques. Si la localisation d'un gène de maladie particulier est recherchée dans un certain chromosome, les chercheurs analyser l'ADN des membres d'une famille atteinte de la maladie, puis rechercher des schémas d'hérédité similaires dans RFLP allèles.
Une fois qu'un gène de la maladie est localisé, la réalisation d'une analyse RFLP sur d'autres membres de la famille pourrait révéler un porteur des gènes mutants ou signaler un risque global de maladie. Il est important de noter que la technique RFLP n'est pas largement utilisée maintenant que des techniques plus récentes et plus robustes sont utilisées pour l'analyse d'ADN en médecine légale et dans plusieurs autres domaines.
Aspects négatifs pf RFLP
Malheureusement, la technique d'analyse RFLP est fastidieuse et lente. Mis à part le fait de nécessiter une grande quantité d’échantillon d’ADN - l’échantillon devrait généralement être de la taille d’un quart environ, relativement grand pour les échantillons d'ADN - le processus, du marquage de la sonde au lavage et à l'autoradiographie, peut prendre jusqu'à un mois complet pour Achevée.
Les résultats du projet sur le génome humain ont pratiquement remplacé le besoin de RFLP. Le projet a permis de déterminer la séquence entière de l'ADN trouvé dans les cellules humaines, le génome humain, et d'identifier tous les gènes du génome humain.